PAN Olsztyn

Metody badawcze

1. Metody in vivo:
   
   • metody biotechniki rozrodu świń i krów: synchronizacja rui, superowulacja, inseminacja;
   • ultrasonograficzna (USG) diagnostyka narządów rodnych świni, krowy i klaczy;
   • laparotomia świń i krów: kaniulacja naczyń krwionośnych układu rodnego; mikrodializa ciałek żółtych i innych struktur narządu rodnego;
   • przyżyciowe pozyskiwania jajników i ciałek żółtych krów (poprzez laparotomię lub kolpotomię);
   • biopsje błony śluzowej macicy krowy;

2. Metody in vitro:

   Izolacja enzymatyczna i hodowle komórkowe:
   
   • komórki nabłonka i tkanki łącznej błony śluzowej macicy świni, krowy, klaczy i kotki,
   • komórki steroidogenne ciałka żółtego krowy, klaczy i kotki,
   • komórki warstwy ziarnistej pęcherzyka jajnikowego krowy,
   • komórki śródbłonka naczyń  krwionośnych ciałka żółtego i błony śluzowej macicy krowy, klaczy i kotki,
   • komórki nabłonkowe zatoki mlekonośnej wymienia krowy.

   Inkubacje tkankowe:

   • skrawki błony śluzowej macicy świni, krowy, klaczy i kotki,
   • skrawki ciałka żółtego świni, krowy i klaczy,
   • skrawki zatoki mlekonośnej wymienia krowy.

3. Metody analityczne

   3.1  Metody biologii molekularnej:
   
   • ekspresja czynników pro- i antyapaptotycznych ( TNFα, IFNγ, IL-1α, Il-6, FasL, BCL2, BAX, Caspase3, Caspase8) i ich receptorów,
   • ekspresja enzymów szlaku steroidogenezy (3β-HSD, StAR, CYTp450),
   • ekspresja enzymów szlaku metabolizmu kwasu arachidonowego:
     
     • szlak powstawania leukotrienów (5-LOX) i ich receptorów
     • szlak powstawania prostaglandyn (PTGS-2, PGES, PGFS, 9KPGR, AKR1B5)
   • ekspresja enzymów związanych z syntezą kwasu lizofosfatydowego (PLD i PLA2) i jego receptorów (LPA1, LPA2, LPA3, LPA4),
   • ekspresja oksytocyny i  jej receptora,
   • ekspresja czynnika wzrostu nerwów i jego receptorów (TrkA, p75) na poziomie mRNA metodą RT Real Time PCR i semiquantitative RT PCR oraz białka metodą Western-blot,
   3.2  Immunoizotopowe oznaczanie (RIA) stężeń:
   
   • hormonów białkowych (LH, PRL) i receptorów  LH/hCG z użyciem preparatów znakowanych jodem (J-125),
   • hormonów steroidowych (P₄, A₄, T, E₁, E₂, kortyzol), prostaglandyn oraz metabolitu PGF2α – PGFM z użyciem hormonów znakowanych trytem (H3) oraz wykonywanie jodowań hormonów białkowych (LH, PRL) i cytokin (IL-1β, IL-6, TNF-α),
   3.3  Immunoenzymatyczne oznaczanie stężeń (ELISA):
   
   • hormonów białkowych (LH),
   • hormonów steroidowych (P4, T4, E2, kortyzol),
   • prostaglandyn (PGE2, PGF2α) oraz metabolitu PGF2α – PGFM,
   • oksytocyny i endoteliny przy zastosowaniu hormonów znakowanych peroksydazą chrzanową (HRP) lub biotyną.,
   3.4  Immunocytochemiczna lokalizacja:
   
   • enzymów szlaku przemian kwasu arachidonowego w jajniku, macicy oraz komórkach nabłonkowych zatok mlekonośnych (PTGS-2, PGES, PGFS, AKR1B5, 5-LO),
   • cytokin w jajniku i macicy (TNF-α, IL-1α, IL-1β i innych),
   • enzymów szlaku przemian cholesterolu w jajniku (P450scc, 3β-HSD, aromatazy) oraz komórkach nabłonkowych zatok mlekonośnych (11β-HSD, 3β-HSD),
   • receptorów (TNFR I, TNFR II, IL-1αR, IL-1 βR, LTRI, LTRII, GC-R, LPAR-1, LPAR-2, LPAR-3, LPAR-4, LPAR4, OTR, TrkA, p75),
   • neuroprzekaźników i ich markerów (NPY, VIP, SOM, SP, GAL, CGRP, PACAP, DβH, VACHT, nNOS),
   3.5  Analiza parametrów krytycznych i gazometrii krwi:
   

   Analiza parametrów gazometrii, elektrolitów i oksymetrii przy zastosowaniu analizatora parametrów krytycznych RAPIDpoint 405 (SIMENS).

   3.6  Morfometryczna analiza krwi:
   

   Podstawowe i rozszerzone badania morfologiczne krwi bydła, kozy, owcy, konia, świni, kota, psa, królika, świnki morskiej, szczura oraz myszy, przy zastosowaniu analizatora hematologicznego ADVIA 2120i (SIMENS).

   3.7  Immunochemiczna–chemiluminescencyjna analiza krwi:
   

   Oznaczanie hormonów steroidowych (P4, T, E2, kortyzol) oraz markerów stanu zapalnego (Il-1β, TNF-α, IL-10, LBP), przy zastosowaniu analizatora immunochemicznego IMMULITE®1000 (SIMENS).

Wykaz aparatury

1. Dwa stanowiska robocze do izolacji i hodowli komórek:
   
   • Komora z przepływem laminarnym Thermo Scientific MSC-ADVANTAGE (180)
   • Komora z przepływem laminarnym Polon’60
   • Komora z przepływem laminarnym Polon’120
   • Inkubator CO2 ThermoForma
   • Inkubator CO2 Sanyo
   • Wirówka MPW 350R 2 szt.
   • Wirówka MPW 223E
   • Pompa perystaltyczna VederFlex Scientific
   • Mikroskop odwrócony standardowy Olympus CKX41 - 2 szt.
   • Inkubatory z wytrząsaniem EB TH15(Edmund Bühler) - 2 szt.
   • Łaźnia wodna z wytrząsaniem Julabo SW23
   • Myjka ultradźwiękowa do pipet Sonorex
   • Autoklaw Sanyo
2. Stanowisko robocze do izolacji kwasów nukleinowych:
   
   • Komora z przepływem laminarnym Holten (90)
   • Wirówka laboratoryjna Hettich Universal 32R
   • Wirówka laboratoryjna Eppendorf miniSpin
   • Aparat do elektroforezy agarozowej BIO-RAD PowerPac
   • UV Ttransilluminator WEALTEC
   • Termocykler BIO-RAD MJ Mini
   • Homogenizator ultradźwiękowy UP50H
   • Homogenizator TissueRuptor Qiagen
3. Stanowisko robocze do Western blot:
   
   • Aparat do elektroforezy poliakryloamidowej BIO-RAD PowerPac
   • Aparat do mokrego transferu BIO-RAD PowerPac
   • Aparat do półsuchego transferu TE70PWR Amersham Biosciences
   • System detekcji białek SNAP i.d. Millipore
   • RollMixer Chemland

4. ZINTEGROWANA PRACOWNIA IMMUNODIAGNOSTYKI

   Zakład wspólnie z Zakładem Immunologii i Mikrobiologii Żywności zorganizował Zintegrowaną Pracownię Immunodiagnostyki.
   

   Ze strony ZIPR w skład Zintegrowanej Pracowni Immunodiagnostyki wchodzi:

   • stanowisko robocze do immunoenzymatycznej analizy stężeń hormonów (ELISA),
   • stanowisko robocze do immunoizotopowej analizy stężeń hormonów (RIA),
   • stanowisko robocze do morfometrycznej analizy krwi,
   • stanowisko robocze do immunochemicznej analizy krwi,
   • stanowisko robocze do analizy parametrów krytycznych i gazometrii krwi.